关于举办“2026 重组蛋白药物大肠杆菌包涵体表达与纯化实战培训班”的通知——从‘沉淀’到‘活性’的破茧之路

各有关单位：

大肠杆菌表达系统以周期短、成本低、表达量高的优势，至今仍是重组蛋白药物（细胞因子、生长因子、肽类激素、纳米抗体等）的主力平台之一。但其“阿喀琉斯之踵”同样突出：大量目标蛋白以不溶性包涵体形式存在，从包涵体到合格原料药的每一步——菌体裂解、洗涤、变性溶解、复性折叠、精纯与内毒素控制——都直接决定收率、活性与成本。复性收率每提升10个百分点，往往意味着商业化利润的根本改善；而洗涤不彻底、复性聚集、内毒素超标，则是中试放大与注册核查中的高频缺陷项。行业普遍缺乏系统化、标准化的全流程方法论，多数从业者依赖师徒相传的经验操作。

鉴于此，我单位将在线上直播举办本次培训，围绕大肠杆菌包涵体蛋白从基因设计、发酵表达到复性纯化的全流程标准化操作与工艺要点，结合大量真实案例逐模块拆解，帮助学员建立可复现、可放大、可申报的工艺开发能力。详细通知如下：

一、主办单位： 药成材信息技术（北京）有限公司

时间：2026年11月21日-22日

地点：线上直播

二、培训目标

通过两天系统培训，学员将能够：

掌握系统选型逻辑：理解大肠杆菌平台与包涵体路线的适用场景及利弊权衡

精通上游设计：掌握密码子优化、载体元件与菌株选择对可溶性表达的影响

规范表达与收获：掌握诱导策略、发酵控制及包涵体制备的标准化操作

攻克复性难关：掌握变性溶解与复性策略的系统优化方法（含DOE应用）

建立纯化体系：掌握层析组合、内毒素去除与质量表征的工业级要求

衔接放大申报：掌握工艺放大、技术转移与CTD资料撰写的要点

三、培训对象

生物药与重组蛋白企业的上游发酵与纯化工程师、工艺开发研究人员、中试与生产技术人员、质量研究与管理（QA/QC）人员、注册申报人员、CRO/CDMO相关技术人员等其他有关人员

四、培训费用

4000元/链接；（会务费包括：培训、研讨、电子版资料、电子版培训证书、一年在线不限次回放等）；请报名人员务必参加直播，以便有序观看回放。

五、联系方式

马超 13240487419

六、课程安排

第一天 上游篇——表达系统设计、发酵工艺与包涵体制备

模块一：为什么还是大肠杆菌——系统选型与包涵体的两面性

核心内容：

重组蛋白表达系统全景对比：大肠杆菌 vs 酵母 vs CHO vs 无细胞体系

包涵体的形成机制与生物学本质：错误折叠还是主动聚集

包涵体路线的隐性优势：高表达、抗蛋白酶降解、杂质易分离

决策框架：什么样的蛋白适合走包涵体路线

大肠杆菌表达重组蛋白的国内外上市品种盘点与启示

案例分享： 某重组细胞因子从CHO细胞转投大肠杆菌平台的成本与周期对比分析

模块二：基因设计与菌株构建——可溶性表达的源头工程

核心内容：

密码子优化与稀有密码子（tRNA）补充策略

载体元件设计：启动子强度（T7/trc/阿拉伯糖）、拷贝数与信号肽

融合标签与促溶标签（His/MBP/GST/SUMO）的选择与酶切除去

菌株选型：BL21(DE3)系列、Rosetta、Origami、SHuffle的适用差异

分子伴侣共表达与降低包涵体形成的理性设计

案例分享： 某蛋白可溶性表达比例从5%提升至60%的三轮设计迭代

模块三：表达工艺开发与发酵控制

核心内容：

诱导策略三要素：诱导剂浓度、诱导时机（OD600）与诱导温度

降温表达与自诱导培养基：减少包涵体的温和表达方案

补料分批发酵：比生长速率控制与诱导期DO/pH/补糖策略

高密度发酵与包涵体产量的权衡：表达量vs正确折叠

表达工艺的可放大性设计：摇瓶到发酵罐的参数映射

案例分享： 某重组蛋白从2L摇瓶到300L发酵罐的表达工艺放大及参数调整

模块四：菌体收获与包涵体制备——不溶物的“干净”学问

核心内容：

离心收获条件与菌体冻存对后续工艺的影响

裂解方法选型：高压匀浆、超声破碎与溶菌酶法的规模适配

包涵体洗涤标准化：低浓度变性剂/去垢剂去除杂蛋白与核酸

包涵体质量评价：纯度（SDS-PAGE）、形态观察与蛋白含量测定

包涵体的保存条件与稳定性考察

案例分享： 某包涵体洗涤步骤内毒素水平控制的工艺优化与数据

第二天 下游篇——复性折叠、精纯工艺与放大申报

模块五：变性溶解——复性的第一步

核心内容：

变性体系选择：尿素与盐酸胍的浓度效应与适用场景

还原策略：DTT、β-巯基乙醇与谷胱甘肽体系的使用要点

变性条件的DOE优化：变性剂浓度、时间、温度与蛋白浓度

变性液中蛋白解聚状态的分析方法

含二硫键蛋白的还原/氧化预处理设计

案例分享： 某蛋白变性条件对后续复性收率影响的DOE研究数据解读

模块六：复性策略——收率的“生死关”

核心内容：

三大复性路径对比：稀释复性、透析复性与柱上复性

复性液配方设计：pH、精氨酸、氧化还原对与添加剂的作用机制

折叠动力学与聚集竞争：蛋白浓度控制的科学依据

高通量复性筛选平台与DOE在复性工艺中的应用

复性终点评价：比活性、聚体（SEC-HPLC）与结构确证

案例分享： 某重组蛋白复性收率从15%提升至55%的系统优化全过程

模块七：精纯工艺与质量表征

核心内容：

层析策略组合：离子交换、疏水作用与凝胶过滤的捕获-精纯设计

内毒素控制与去除：从工艺设计到检测确认

宿主蛋白（HCP）、残留DNA与工艺相关杂质的控制标准

质量表征要点：比活性、纯度、N端甲硫氨酸、二硫键配对与聚体谱

中间体控制点设置与IPC标准制定

案例分享： 某产品精纯路线从五步层析精简为三步的工艺重构

模块八：工艺放大与技术转移

核心内容：

复性工艺的放大挑战：稀释复性的体积爆炸问题与连续流复性等对策

层析放大：柱径放大、线性流速与填料载量的一致性评价

工艺放大前后可比性研究设计与接受标准

技术转移文件包：批记录、SOP与工艺表征报告的移交要求

放大常见缺陷：混合不均、复性批间波动与对策

案例分享： 某品种从研发实验室到GMP车间技术转移的问题清单与整改

模块九：工艺验证与注册申报要点

核心内容：

包涵体工艺的CPP/CQA识别与控制策略矩阵

CTD 3.2.S中表达系统与纯化工艺资料的撰写逻辑

大肠杆菌表达品种的常见审评问题与缺陷分析

案例分享： 某大肠杆菌表达重组蛋白IND申报资料的组织与审评答复

授课老师

孙老师  资深重组蛋白工艺开发专家，20年以上大肠杆菌表达平台经验，曾主导多个细胞因子与纳米抗体品种的表达、复性与纯化工艺开发及放大。

周老师  任职国内知名生物医药公司，近20年下游纯化与质量研究经验，具有丰富的层析工艺开发与GMP技术转移经验。

吴老师  发酵工艺与过程放大专家，经验丰富

附件：2026 重组蛋白药物大肠杆菌包涵体表达与纯化实战培训班--报名表